Evaluation of different methods for preventing the African swine fever virus
| Author | Affiliation | |||
|---|---|---|---|---|
LT | Nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas | LT | ||
LT | Nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas | LT | ||
LT | Nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas | LT | ||
Pridotkas, Gediminas | Nacionalinis maisto ir veterinarijos rizikos vertinimo institutas | LT | ||
| Date |
|---|
2020 |
Afrikinio kiaulių maro (AKM) suvaldymui iki šiol nėra jokios vakcinos ar gydymo, todėl ligos stebėjimas ir ankstyva diagnostika yra vienintelis būdas ją kontroliuoti. Labai svarbu yra įdiegti naujus ir greitus molekulinius AKM diagnozavimo metodus, pasižyminčius dideliu jautrumu ir specifiškumu. Šio tyrimo tikslas buvo parinkus tinkamus reakcijos pradmenis ir zondus, reakcijos buferius ir pradme-nų prilydimo temperatūrą, optimizuoti daugybinės realaus laiko PGR metodą, kuriuo galima aptiktiAKM virusą ir užtikrinti vidinę kontrolę, bei palyginti AKM viengubos (250 bp AKM fragmentas) ir AKM-IC daugybinės (75 bp AKM fragmentas) realaus laiko PGR metodus. Buvo patvirtintas daugybinės realaus laiko PGR metodo specifiškumas ir jautrumas. Gauti rezultatai rodo, kad AKM-IC daugybinės realaus laiko PGR metodas yra greitesnis ir jautresnis nei realaus laiko PGR (juo nustatomas tik 250 bp AKM fragmentas) nustatant AKM virusą naminių kiaulių ir šernų kaulų čiulpų, širdies, inkstų, kepenų, blužnies, plaučių, maisto produktų ir kt. mėginiuose. Po tyrimų Ct vertės pagal šiuos metodus skyrėsi per 0,55–8,4 ciklo, tai reiškia, kad daugybinės realaus laiko PGR metodu sintetinama 0,3–70,5 karto daugiau reakcijos produkto.
African swine fever (ASF) is a contagious disease of key importance that occurs in wild boar population and domestic pigs. To date, there is no vaccine or treatment available, hence disease surveillance and stamping out in case of an outbreak is the only way to control it. A duplex ASF-IC real-time PCR assay was optimised using field samples obtained in Lithuania and results of singleplex and duplex real-time PCR assays allowing the identification of the ASF virus were compared. The specificity and sensitivity of ASF virus detection was validated using a reference sample of positive and negative virus nucleic acid and ASF virus positive and negative samples obtained from animals in Lithuania. Results prove that duplex ASF-IC real-time PCR assay provides a rapid, sensitive, and reliable molecular tool for ASF virus detection in wild boar population and domestic pigs. In general, it was found that duplex ASF-IC real-time PCR assay proves to be faster and more sensitive than singleplex real-time PCR and therefore has a high potential to be applied in routine analysis.