Inokuliavimo Agrobacterium tumefaciens poveikis žieminio rapso regeneracijai in vitro

Abstract

Tyrimai atlikti Lietuvos žemės ūkio universiteto Agrobiotechnologijos laboratorijoje. Darbo tikslas – įvertinti žieminių rapsų eksplantų kokultivavimo su agrobakterijomis, turinčiomis skirtingas plazmides, poveikį regeneracijos procesui in vitro. Brassica napus stiebo segmentai inokuliuoti Agrobacterium tumifaciens GV3101 kamienu, turinčiu skirtingas plazmidinių vektorių konstrukcijas: pART-BnMYBsn-MYBanti, pHellsgate-BnCBF ir pHellsgate-BnICE. Nustatyta, kad žieminių rapsų organogenezės proceso intensyvumą in vitro lėmė augalo genotipas ir inokuliavimui naudojamo vektoriaus konstrukcija. Eksplantų inokuliavimas bakterijomis, turinčiomis skirtingas plazmides, neturėjo esminės įtakos veislių ‘Libea’, ‘Liprima’ ir ‘Siska’ organogenezės procesui. Kitų tirtų žieminių rapsų veislių ūglių susiformavimo dažnis po kokultivavimo su A. tumefaciens labai sumažėjo. Kanamicinui atsparių augalų regenerantų susiformavimo dažnį daugiausia lėmė augalo genotipo ir agrobakterijos, turinčios skirtingas plazmides, sąveika. ‘Banjo H’ veislės didžiausias atsparių regenerantų kiekis gautas inokuliavus agrobakterijomis su pHellsgate-BnICE, ‘Elvis’, ‘Valesca’, ‘Libea’, ‘Liprima’ ir ‘Insider’ veislių – su pHellsgate-BnCBF, ‘Silvia’ ir ‘Siska’ veislių – su pART-BnMYBsn-MYBanti

The investigations were carried out in the Agrobiotechnology Laboratory of Lithuanian University of Agriculture. Aim of the research – to evaluate effect of co-cultivation of the explant with agrobacterium, containing the different plasmids, on regeneration response of winter rapeseed. Stem segments of Brassica napus co-cultivated with Agrobacterium tumifaciens GV3101 strain containing the plasmids pART-BnMYBsn-MYBanti, pHellsgate-BnCBF and pHellsgate-BnICE. The results of the experiments indicated a difference among the tested cultivars regarding their organogenic response depended on genotype and vector construction. Explants inoculation with agrobacterium containing different plasmids didn’t have any significant effect on adventitious shoots formation in cultivars ‘Libea’, ‘Liprima’ (pART-BnMYBsn-MYBanti and pHellsgate-BnICE) and cultivar ‘Siska’ (pHellsgate-BnICE). The co-cultivation of explants with A. tumefaciens had a significant negative influence on shoot formation frequency of other tested cultivars. Kanamycin-resistant plant-regenerants formation frequency strongly depended on genotype-plasmid interaction. Highest amount of resistant regenerants have been obtained after inoculation with A. tumefaciens containing pHellsgate-BnICE (cv. ‘Banjo H’); pHellsgate-BnCBF (cvs. ‘Elvis’, ‘Valesca’, ‘Libea’, ‘Liprima’ and ‘Insider’); pART-BnMYBsn-MYBanti (cvs. ‘Silvia’ and ‘Siska’)