Callus induction and plant regeneration from somatic tissue in spring rapeseed (Brassica napus L.)

Abstract

Tirtas maitinamosios terpės, eksplanto ir genotipo poveikis vasarinių rapsų (Brassica napus L.) pridėtinių ūglių formavimuisi. Dvigubų haploidų linijų NL-611, NL-662 ir NL-685 hipokotilių ir skilčialapių audiniai formavo kalių MS maitinamojoje terpėje, papildytoje skirtingomis 6-benzilaminopurino (BAP) ir α-naftilacto rūgšties (NAR) bei zeatino ir 2,4-dichlorfenoksiacto rūgšties (2,4-D) koncentracijomis. Pridėtinių pumpurų regeneracija vyko iš organogeninio kaliaus toje pačioje maitinamojoje terpėje. Ūglių susiformavimo dažnumas varijavo nuo 0 iki 37,5%, o pumpurų kiekis iš eksplanto – nuo 0 iki 3,8 vnt. Skilčialapių audinių suformuotas kalius pumpurus formavo dažniau nei hipokotilių suformuotas kalius, tačiau didesnis pumpurų kiekis vienam eksplantui gautas auginant hipokotilių suformuotą kalių. Didžiausias pumpurų susiformavimo iš hipokotilių audinių suformuoto kaliaus dažnis nustatytas terpėje su 4,0 mg l–1 BAP ir 0,05 mg l–1 NAR. Regeneravusių ūglių rizogenezė indukuota MS terpėje, papildytoje 0,1 mg l–1 NAR. Augalai regenerantai su gerai išsivysčiusiomis šaknimis adaptuoti auginimo kambaryje

The effect of culture media, explants and genotypes on adventitious shoot regeneration in spring rapeseed (Brassica napus L.) was examined. Hypocotyls and cotyledons of the doubled haploid lines NL-611, NL-662, NL-685 were induced to form callus by culturing on the Murashige– Skoog medium supplemented with different concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP) and α-naphtylacetic acid (NAA) or zeatin and 2,4-dichlorphenoxyacetic acid (2,4-D). Adventitious buds were regenerated from the organogenic callus on the same medium. A large variation of shoot regenerability was observed, ranging within 0–37.5% for the frequency of bud formation and within 0–3.8 for the number of buds per explant. Generally, cotyledon-derived callus exhibited a higher bud regeneration frequency than hypocotyls, however, hypocotyl-derived callus developed a higher number of buds per explant. The maximum number of adventitious buds from hypocotyl-derived callus was obtained on a medium supplemented with 4.0 mg l–1 BAP and 0.05 mg l–1 NAA. Regenerated shoots were rooted in MS medium containing 0.1 mg l–1 NAA. Well rooted plantlets were acclimatized and subsequently established in soil