Cytotoxicity of electric pulse, bleomycin, ascorbate, and menadione and synergism of their combinations in vitro
Darbe tirti stipraus elektrinio lauko impulso, bleomicino, askorbato ir menadiono citotoksiškumai bei galimybės pagerinti jų priešvėžinį poveikį, derinant tarpusavyje. Tyrimai atlikti in vitro su navikinėmis pelės hepatomos MH-22A ir žiurkės gliomos C6 ląstelėmis bei nenavikinėmis kininio žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląstelėmis ir žmogaus eritrocitais. Ląstelių elektroporacijos nustatymo pagal viduląstelinių kalio jonų ištekėjimo registraciją metodas pirmą kartą buvo pritaikytas įvairių tipų ląstelių elektroporacijai in vitro tirti ir pirmą kartą elektroporacijos slenksčiai palyginti skirtingo tipo ląstelėms. Parodyta kad ilgėjant impulso trukmei, didėja sukuriamų porų dydis. Rezultatai parodė, kad skirtingų tipų ląstelių elektroporacija vyksta pagal tą patį mechanizmą. Bleomicinui ir askorbatui jautriausios buvo žiurkės gliomos C6 ląstelės, o atspariausios – CHO ląstelės. Menadiono ir elektrinio impulso citotoksiškumai buvo tokie patys visoms ląstelėms. Vėžio gydymo efektyvumą galima padidinti derinant kelis vaistus ar gydymo metodus, ypač jei derinamų gydymo metodų veikimas pasižymi sinergizmu. Sinergistiniu veikimu vėžio gydyme pasižymi šiame darbe tirti deriniai – elektriniai impulsai ir bleomicinas (elektrochemoterapija) bei askorbato ir menadiono mišinys santykiu 100:1. Elektrinis impulsas sumažino bleomicino citotoksinę koncentraciją LD50 nuo 450 iki 5∙104 kartų, o vitaminas C sumažino vitamino K3 citotoksinę koncentraciją LD50 2,5–5 kartus.
Cytotoxicities of an electric field pulse, bleomycin, ascorbate, and menadione in vitro and possibilities to increase anticancer efficiency by using their combinations have been studied. The method of the determination of the fraction of electroporated cells based on measuring the release of intracellular potassium ions was adapted successfully for various types of cells in small volume samples (30–50 l) in vitro. The relationships between the parameters of the electric field pulse, which is necessary to electroporate the cells, as well as the dependences of the pore sizes on the pulse duration are almost the same for various cancerous and noncancerous cells, which indicates that the mechanism of electroporation is the same for all these cells. Rat glioma C6 cells were the most sensitive to the action of bleomycin and ascorbate in vitro, while Chinese hamster ovary (CHO) cells were the most resistant to these cytotoxic agents. Cytotoxicities of menadione and electric field pulse were almost the same for cancerous MH-22A and C6 cells and noncancerous CHO cells. Cytotoxic action of some of the combinations of the cytotoxic agents studied, such as, electric pulse and bleomycin, as well as the mixture of vitamins C and K3 at the ratio of 100:1, is synergistic towards cancerous MH-22A and C6 cells and noncancerous CHO cells in vitro. Electric pulse decreased cytotoxic dose LD50 for bleomycin from 450 to 5∙104 times, while LD50 for menadione was decreased 2,5–5-fold by ascorbate.