Veiksniai, lemiantys kanapės morfogenezę in vitro
Magistrantūros studijų baigiamajame darbe pateikiami 2014–2015 metais Aleksandro Stulginskio universiteto Agronomijos fakulteto Biologijos ir augalų biotechnologijos instituto ir Agrobiotechnologijos laboratorijoje tirtų veiksnių, lemiančių kanapės morfogenezę somatinių audinių kultūroje, rezultatai. Darbo objektas – dvi sėjamosios kanapės veislės: ‛Bialobrzeskie’ ir ‘Beniko’. Stiebo segmentų, lapų ir hipokotilių eksplantai auginti MS terpėje su skirtingais augimo reguliatorių kiekiais. Darbo metodai. Sėjamosios kanapės sėklos plautos po tekančiu vandeniu 1 val., 15 min. sterilintos 0,2 % kalio permanganato tirpale, 2 min. laikytos 70 % etanolio vandeniniame tirpale, 9 min. 10 % natrio hipochlorite ir 3 kartus po 5 min. mirkytos distiliuotame vandenyje. Sterilios sėklos daigintos ant MS maitinamosios terpės be augimo reguliatorių, papildytoje 10 g l-1 sacharozės ir 8 g l-1 Difco-Bacto agaru. MS terpėje su skirtingais augimo reguliatorių kiekiais auginta po 60 eksplantų. Vertintas kaliaus susidarymo dažnis (%). Darbo rezultatai. Įvertinus sėjamosios kanapės kaliaus indukcijos tyrimų rezultatus nustatyta, kad sėjamosios kanapės izoliuoti audiniai geba formuoti kalių ir terpėje be augimo reguliatorių. Papildžius maitinamąją terpę augimo reguliatoriais bei jų deriniais, intensyvėjo kaliaus formavimosi dažnis. Sėjamosios kanapės ‛Bialobrzeskie’ veislės stiebo segmentų audiniai pasižymėjo didesne morfogenine galia nei hipokotilių bei lapų audiniai. Izoliuoti ‛Bialobrzeskie’ stiebo segmentai intensyviausiai (100%) kalių formavo maitinamojoje terpėje, papildytoje 1,0 mg l-1 BAP, 2,0 mg l-1 BAP, 2,0 mg l-1 TDZ bei augimo reguliatorių derinių 2,0 mg l-1 BAP+0,5 mg l-1 NAR, 2,0 mg l-1 TDZ+0,5 mg l-1 NAR poveikyje. Veislės ‘Beniko’ hipokotiliai kalių formavo intensyviau, negu stiebo segmentai ir lapai. Sėjamosios kanapės ‘Beniko’ hipokotilių dediferencijacijos indukcijai efektyviausias buvo augimo reguliatorių derinys 1,0 mg l-1 TDZ + 0,5 mg l-1 NAR. Nustatyta, kad ‛Bialobrzeskie’ veislė pasižymėjo didesne morfogenine galia nei ‘Beniko’.
The master work presents the results of factors affecting hemp morphogenesis in somatic tissue culture. The experiment was carried out at the Laboratory of Agrobiotechnology, Faculty of Agronomy of Aleksandras Stulginskis University in 2014–2015. Object of the work – two cultivars of hemp: ‛Bialobrzeskie’ and ‘Beniko’. Investigation in vitro was carried out with hemp stem segments, leaves and hypocotyls explants. Method of the work – seeds were surface sterilized and placed on MS nutrient medium without growth regulators, supplemented with 10 g l-1 sucrose and 8 g l-1 Difco Bacto-agar. Media adjusted to pH 5.5 prior to autoclaving at 115 ºC for 30 min. Culture media (20 ml) were dispensed into 90 mm diameter Petri dishes and sealed with parafilm. For investigation in vitro were used explants from sterile culture. The explants were placed on MS medium supplemented with different combinations of growth regulators. Experiment was set up in a completely randomized design and three replicates per treatment with 60 explants for each replicate were used. The percentage of callus formation frequency were calculated. The results of the work – callus formation in low frequency from explant of hemp can be induced on medium without growth regulators. However exogenous growth regulators significantly increased rate of callus induction. In the ‘Bialobrzeskie’ cultivar, the stem segments showed the highest morphorgenic response compared to the hypocotyl and the leaf segments. Highest callus induction frequency in the stem segments of the ‘Bialobrzeskie’ cultivar (100 %) has been obtained on medium supplemented with 1.0 mg L-1 BAP; 2.0 mg L-1 BAP; 2.0 mg L-1 TDZ; 2.0 mg L-1 BAP+0.5 mg L-1 NAA and 2.0 mg L-1 TDZ+0.5 mg L-1 NAA. In the ‘Beniko’ cultivar, the hypocotyl segments showed the highest morphorgenic response compared to the stem and the leaf segments. Highest callus induction frequency in the hypocotyl segments of the ‘Beniko’ cultivar has been obtained on medium supplemented with and 1.0 mg L-1 TDZ+0.5 mg L-1 NAA. The ‘Bialobrzeskie’ cultivar had shown a significant higher morphogenic response in comparison with the cultivar ‘Beniko’.