Detection of chromosomal breakpoints using LDI-PCR methods and Nanapore sequencing

Abstract

Chromosomal breakpoints are an important phenomenon to understand the mutation and gene fusion. In this study, long target length primers were used to cover the gene segments. Primers were designed for IGH, MLL, RUNX1, ETV6 genes respectively. The products lengths were achieved by touchdown PCR. The products which are near to expected size are targeted to nanopore sequencing to check the breakpoints in any of the genes. By using nanopore flow cell MiniON, the pool of targeted amplicons were sequenced. and if any split reads were found during the validation of data is considered significant. And further analysis includes gene mapping.

Chromosomų lūžiai yra svarbūs reiškiniai, siekiant suprasti mutaciją ir geno sintezę. Šiame tyrime buvo naudojami ilgi tikslinio ilgio pradmenys geno segmentams padengti. Gruntai buvo sukurti atitinkamai IGH, MLL, RUNX1, ETV6 genams. Produktų ilgis buvo pasiektas palietus PCR. Produktai, kurie yra artimi numatomam dydžiui, yra nukreipti į nanoporei seką, kad būtų galima patikrinti bet kurio iš genų lūžio taškus. Naudojant nanoporos srauto kamerą „MiniON“, sekos tikslinių amplikonų grupė. ir jei nustatant duomenis buvo nustatyta, kad duomenys yra suskaidyti, laikoma reikšminga. Tolesnė analizė apima genų kartografavimą.