Pelėno rekombinantinio baltymo BvPrp121-231 gamyba ir agregacijos tyrimai

Abstract

Prionai yra baltymai, kurie gali įgyti dvi formas, natyvią formą ir netinkamai susilanksčiusią patogeninę formą. Netinkamai susilanksčiusi forma siejama su klaidingo baltymų susilankstymo ligomis, kurių metu susiformuoja amiloidinės fibrilės. Tam, kad būtų galima tyrinėti prionus ir jų fibriles, visų pirma reikia turėti pakankamą kiekį natyvių prioninių baltymų. Darbo metu atlikta pelėno prioninio baltymo (BvPrP121-231) ekspresija E. coli BL21 Star™ (DE3) kompetentiniame kamiene. Bakterijos augintos, naudojant auto-indukcinę mitybinę terpę. Gauta biomasė gryninta imobilizuotų metalų jonų afininė chromatografijos (IMAC) būdu. Gautam prioninaim baltymui atlikti agregacijos, fibrilių stabilumo ir ilgėjimo tyrimai.

Prions are proteins that can adopt two different forms, a normal form and a pathogenic misfolded form. Misfolded form is binded with broad range of diseases that arises from the failure of peptides or proteins structure. One of the protein misfolding examples is formation of amyloidogenic fibrils. In order to study prions and their fibrils, we need to have a sufficient amount of prion protein. In this work, construct was obtained and used for further work. E. coli BL21 Star™ (DE3) bacterial cell strains were used for bank vole prion protein (BvPrP121–231) expression. Bacterias was grown in auto-inductive medium. Biomass was purified immobilized metal ions afinical chromatography (IMAC) method. For recombinant prion protein was done aggregaction, fibrils stability and elongation researches.