Azoto monoksido donoro NOC-18 poveikio širdies mitochondrijoms išemijos metu mechanizmo tyrimas

Abstract

Išemija pažeidžia širdį, jos metu žūsta kardiomiocitai. Azoto monoksidas apsaugo ląsteles nuo išemijos neleisdamas formuotis MNPP, per baltymų kinazes G ir C. PKC epsilon siejama su apsauginiu poveikiu širdies mitochondrijose dėl MNPP formavimosi slopinimo išemijos metu. Darbo metu buvo tirtas PKC epsilon baltymo kiekio pokytis širdies ląstelių citozolinėse ir mitochondrinėse frakcijose. Atlikti eksperimentai su 4 grupėmis: kontroline, kontroline perfuzuojant su NO donoru NOC-18, 30 min. išemijos ir 30 min. išrmijos prieš tai perfuzuojant su NO donoru. Mitochondrinė ir citozolinė frakcijos buvo išskiriamos diferenciniu centrifugavimu, atlikta elektroforezė ir Westernblot analizė. Buvo naudoti antikūnai: prieš PKC epsilon baltymus, vidinei kontrolei citozoliniams baltymams prieš beta-aktiną, mitochondrijų baltymams – prieš VDAC. Ištirta, kad išemijos metu citozolyje padaugėja PKC epsilon baltymo lyginant su kontrole. Mitochondrijose baltymo kiekis nepadidėjo išemijos metu. NO donoras NOC-18 neturėjo įtakos baltymo kiekiui mitochondrijose ir citozolyje.

During ischemia cardymiocytes die which dameges the heart. Nitric oxide protects the cells from ischemic damage by activating protein kinases G and C. Activated PKC epsilon protects mitochondria from ischemic damage by inhibiting MPTP. Here we tried to determine how PKC epsilons concentration changes in cells cytosol and mitochondria after 30 min. ischemia and if NO donor NOC-18 has any affect on it. Hearts were perfused, mitochondrial and cytosolic factions extracted using diferencial centrifgation and after separating them using electrophoresis Westernblot analysis was performed. Anti PKC epsilon antibodies were used for protein of interest, anti VDAC and anti beta-Actin antibodies were used for housekeeping proteins for mitochondrial and cytosolic proteins. The results show an increase of PKC epsilon in cytosol after ischemia. No increase was detected in mitochondria after ischemia. NO donor NOC-18 had no effect on PKC epsilon concentration neather in cytosol or mitochondria.