Baltymų elektroišnašos efektyvumo iš vėžinių ir nevėžinių ląstelių tyrimai in vitro

Elektroporacija (EP) yra metodas, kuriuo pralaidinama plazminė membrana naudojant aukštos įtampos impulsus. Per šias pralaidžias struktūras (kitaip dar vadinamas poromis) į ląstelę ar iš jos gali judėti įvairios molekulės arba stambiamolekuliniai junginiai. El. lauko poveikis ląstelei yra tiriamas jau ne vienerius metus, bet dažniausiai eksperimentai atliekami norint stebėti molekulių patekimą į ląsteles, bet ne jų ištekėjimą iš ląstelių ir kaip tai paveikia jų gyvybingumą. Šio tyrimo tikslas yra nustatyti baltymų elektroišnašos iš ląstelių efektyvumą in vitro, keičiant elektroporacijos sąlygas ir parametrus. CHO (nevėžinės) ir 4T1 (vėžinės) ląstelės buvo elektroporuotos nuo 0,6 kV/cm iki 4,8 kV/cm lauko stipriu naudojant 1 arba 9 aukštos įtampos (HV) impulsus, kurių trukmė – 100 µs, dažnis – 1 Hz. BCA tyrimas buvo naudojamas siekiant nustatyti bendrą baltymų kiekį mėginiuose lyginant su kontrole (neelektroporuotomis ląstelėmis). Rezultatai parodė, kad baltymų išsiskyrimas iš elektropralaidintų ląstelių priklauso nuo impulso stiprio ir jų skaičiaus.

Electroporation (EP) is the process which uses high voltage electrical pulses to form the permeable structures in the plasma membrane of a cell. Through these permeable structures (also called pores), various molecules or macromolecular compounds can move into or out of the cell. the effects of the electric field on the cell have been studied for many years, but most experiments are performed to monitor the entry of molecules into the cells but not their outflow from the cells and how this affects their viability. The aim of this study is to determine the efficiency of protein electroextraction from cells in vitro by altering electroporation conditions and parameters. CHO (non-cancerous) and 4T1 (cancerous) cells were electroporated at a field strength of 0.6 kV / cm to 4.8 kV / cm using 1 or 9 high voltage (HV) pulses with a duration of 100 µs and a frequency of 1 Hz. The BCA assay was used to determine the total protein amount of the samples compared to the control (non-electroporated cells). The results showed that the release of proteins from electroplated cells depends on the pulse strength and their number.