Resveratrolio įtaka HeLa Cx43 ir HeLa Cx45 ląstelių gyvybingumui ir koneksinų raiškai

Abstract

Resveratrolis yra biologiškai aktyvi medžiaga, gerai žinoma dėl daugelio biologinių savybių (Salehi B., 2018). Resveratrolio poveikis yra siejamas su koneksinų raiškos ir plyšinių jungčių laidumo pokyčiais ląstelėse (Xiao, J. ir kt., 2018). Yra žinomas resveratrolio poveikis įvarių koneksinų raiškai, tačiau duomenų apie resveratrolio poveikį Cx45 mūsų žiniomis nėra. Mes siekėme išsiaiškinti, kaip resveratrolis veikia HeLa ląstelių dalijimąsi priklausomai nuo koneksino tipo ir koneksino raiškos. Tyrimams buvo naudojamos 0, 1, 10 ir 100 μM resveratrolio koncentracijos, gyvybingumas buvo vertinamas po 48 val. poveikio, o koneksinų raiška įvertinta po 24 val. ir 48 val. poveikio resveratroliu. Tėkmės citometrijos metodu nustatėme, kad visų tirtų ląstelių linijų (Hela WT, HeLa Cx43 ir HeLa Cx45) proliferacija sumažėjo paveikus 100 μM resveratroliu, o apoptotinių ląstelių kiekis ir mitochondrijų membranos potencialas padidėjo. Resveratroliui jautresnės buvo HeLa Cx43 ląstelės, nes HeLa Cx43 apoptotinių ląstelių kiekis po 48 val. paveikio 100 μM resveratroliu siekė 38 proc., o HeLa WT ir HeLa Cx45 atitinkamai 13 proc. ir 22 proc. Imunoblotingo metodu nustatėme, kad HeLa Cx43 ląstelėse koneksino Cx43 kiekis po 24 val. didėjo veikiant 10 μM ir 100 μM resveratrolio koncentracijomis, o po 48 val. šių baltymų kiekis mažėjo. Ląsteles paveikus 100 μM resveratroliu Cx45 kiekis padidėjo tiek po 24 val., tiek po 48 val. Tik po 48 val. poveikis 10 μM resveratroliu HeLa Cx45 ląstelėse sumažino Cx45 raišką. Naudojant imunocitocheminį metodą pastebėjome, kad Cx43 raiška koreliuoja su PJP dydžiu HeLa Cx43 ląstelėse, o HeLa Cx45 ląstelėse Cx45 raiškos pokyčiai nekoreliavo su PJP dydžiu.