Resveratrolio įtaka HeLa Cx43 ir HeLa Cx45 ląstelių gyvybingumui ir koneksinų raiškai
Resveratrolis yra biologiškai aktyvi medžiaga, gerai žinoma dėl daugelio biologinių savybių (Salehi B., 2018). Resveratrolio poveikis yra siejamas su koneksinų raiškos ir plyšinių jungčių laidumo pokyčiais ląstelėse (Xiao, J. ir kt., 2018). Yra žinomas resveratrolio poveikis įvarių koneksinų raiškai, tačiau duomenų apie resveratrolio poveikį Cx45 mūsų žiniomis nėra. Mes siekėme išsiaiškinti, kaip resveratrolis veikia HeLa ląstelių dalijimąsi priklausomai nuo koneksino tipo ir koneksino raiškos. Tyrimams buvo naudojamos 0, 1, 10 ir 100 μM resveratrolio koncentracijos, gyvybingumas buvo vertinamas po 48 val. poveikio, o koneksinų raiška įvertinta po 24 val. ir 48 val. poveikio resveratroliu. Tėkmės citometrijos metodu nustatėme, kad visų tirtų ląstelių linijų (Hela WT, HeLa Cx43 ir HeLa Cx45) proliferacija sumažėjo paveikus 100 μM resveratroliu, o apoptotinių ląstelių kiekis ir mitochondrijų membranos potencialas padidėjo. Resveratroliui jautresnės buvo HeLa Cx43 ląstelės, nes HeLa Cx43 apoptotinių ląstelių kiekis po 48 val. paveikio 100 μM resveratroliu siekė 38 proc., o HeLa WT ir HeLa Cx45 atitinkamai 13 proc. ir 22 proc. Imunoblotingo metodu nustatėme, kad HeLa Cx43 ląstelėse koneksino Cx43 kiekis po 24 val. didėjo veikiant 10 μM ir 100 μM resveratrolio koncentracijomis, o po 48 val. šių baltymų kiekis mažėjo. Ląsteles paveikus 100 μM resveratroliu Cx45 kiekis padidėjo tiek po 24 val., tiek po 48 val. Tik po 48 val. poveikis 10 μM resveratroliu HeLa Cx45 ląstelėse sumažino Cx45 raišką. Naudojant imunocitocheminį metodą pastebėjome, kad Cx43 raiška koreliuoja su PJP dydžiu HeLa Cx43 ląstelėse, o HeLa Cx45 ląstelėse Cx45 raiškos pokyčiai nekoreliavo su PJP dydžiu.
Resveratrol, a polyphenol found in plants like grapes and blueberries, is known for its antioxidant, anticancer, and cardioprotective properties. It inhibits cancer cell proliferation and induces apoptosis. Resveratrol can regulate connexin expression and affect gap junction permeability. Research has shown its effects on various connexins, but data on Cx45 are lacking. This study aimed to investigate resveratrol's impact on HeLa cancer cell division based on connexin type. Cell viability and connexin expression were assessed after resveratrol treatment. Results showed that 100 μM resveratrol reduced proliferation and increased apoptosis in HeLa WT, HeLa Cx43, and HeLa Cx45 cells, with HeLa Cx43 being the most sensitive. After 48 hours, the apoptotic rate was 38% in HeLa Cx43 cells, compared to 13% in HeLa WT and 22% in HeLa Cx45 cells. Western blot analysis revealed that Cx43 levels increased after 24 hours but decreased after 48 hours in HeLa Cx43 cells. Cx45 expression increased with 100 μM resveratrol at both time points but decreased with 10 μM resveratrol after 48 hours. Immunocytochemical analysis showed that Cx43 expression correlated with gap junction plaque (GJP) size in HeLa Cx43 cells, while changes in Cx45 expression did not correlate with plaque size in HeLa Cx45 cells. A significant increase in Cx45 expression was observed after treatment with 100 μM resveratrol, but Cx45 was mainly cytoplasmic. 10 μM resveratrol did not change connexin expression in HeLa Cx45 cells, but GJP size was larger compared to control.