Kalcio jonų citotoksiškumas CHO ir MX-1 ląstelių linijoms in vitro taikant elektroporaciją
Labutis, Donatas |
Šiame darbe buvo atliekami CaCl2 citotoksiškumo tyrimai kininio žiurkėno kiaušidžių (CHO) ir žmogaus krūties karcinomos (MX-1) ląstelėms taikant elektroporaciją in vitro. Pirmiausia buvo atlikti bandymai, kurių metu buvo siekiama ištirti skirtingų CaCl2 koncentracijų (0 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 5 mM) poveikį ląstelių gyvybingumui netaikant elektroporacijos. Nustatyta, kad visos naudotos CaCl2 koncentracijos statistiškai patikimo poveikio ląstelių gyvybingumui neturėjo. Tolimesni tyrimai buvo tęsiami, siekiant patikrinti skirtingų CaCl2 koncentracijų (0 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 5 mM ) poveikį ląstelių gyvybingumui po elektroporacijos taikant MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium) ir kolonijų testo metodus ląstelių gyvybingumui įvertinti. Rezultatai parodė, kad taikant elektroporacija kartu su CaCl2 pastebimas citotoksiškas poveikis abiems tyrimuose naudotoms ląstelių kultūroms. Matoma, kad didžiausias poveikis CHO ląstelių gyvybingumui ~ 28-51 % gyvybingų ląstelių, bei metaboliniam aktyvumui ~27-44 % gyvybingų ląstelių yra naudojant 1-5 mM CaCl2 koncentracijas ir 1 impulso 1200, 1400 V/cm elektrinius parametrus. Įvertinus CaCl2 poveikį CHO ląstelių gyvybingumui po elektroporacijos, taip pat buvo įvertintas MX-1 ląstelių gyvybingumas bei metabolinis aktyvumas atliekant analogiškus ekpserimentus. Bandymų rezultatai rodo, kad didžiausias poveikis MX-1 ląstelių gyvybingumui ~13-39 % gyvybingų ląstelių bei metabiliniam aktyvumui ~12-29 % gyvybingų ląstelių buvo naudojant 1-5 mM CaCl2 koncentracijas ir 1 impulso 1000, 1200, 1400 V/cm elektrinius parametrus.
The aim of this study is to investigate the effect of CaCl2 cytotoxicity on Chinese hamster ovary (CHO) and human breast carcinoma (MX-1) cell lines using electroporation in vitro. First, experiments were performed to study the effect of different CaCl2 concentrations (0 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 5 mM) on cell viability without electroporation. All used CaCl2 concentrations were found to have no statistically significant effect on cell viability. Further studies were continued to verify the effect of different CaCl2 concentrations (0 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 5 mM) on cell viability after electroporation using MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5- diphenyltetrazolium) and colony test methods. The results showed that applying electroporation with CaCl2 (0 mM, 0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 5 mM) induced cytotoxic effects on both cell lines used in the experiments. From experimental data it can be seen that using 1-5 mM CaCl2 concentrations and 1 pulse of 1200, 1400 V/cm electrical parameters CHO cell viability is ~28-51 % and metabolic activity, ~27-44 % respectively. After the evaluation of CaCl2 effect on CHO cell viability, the same experiments were performed with MX-1 cells. The experimental results showed that using 1-5 mM CaCl2 concentrations and 1 pulse of 1000, 1200, 1400 V/cm electrical parameters MX-1 cell viability is ~13-39% and metabolic activity ~12-29% respectively.