Hemotropinių mikoplazmų paplitimas šuniniuose (Canidae) Lietuvoje
Pranckūnaitė, Vaida |
Tyrimo tikslas – taikant molekulinius metodus, įvertinti pilkųjų vilkų (Canis lupus), rudųjų lapių (Vulpes vulpes) ir paprastųjų šakalų (Canis aureus) užsikrėtimą Mycoplasma spp. bakterijomis. Tyrimo objektas – Lietuvos šuniniai (Canidae) – pilkieji vilkai (Canis lupus), rudosios lapės (Vulpes vulpes), paprastieji šakalai (Canis aureus). Tyrimo metodologija/metodai - Genominė DNR išskiriama naudojant Genomic DNA Purification Kit rinkinį, DNR grynumas, švarumas ir kiekis įvertinamas naudojant NanoDrop 2000 sistemą, atliekama Mycoplasma spp. 16S rRNR ir P ribonukleazės genų amplifikacija naudojant PGR, rezultatai vizualizuojami naudojant elektroforezės gelio UV šviesoje padarytą nuotrauką. Gauti fragmentai išpjaunami iš gelio ir naudojant GeneJET Gel Extraction Kit rinkinį paruošiami sekoskaitai. Gautų duomenų analizė atlikta naudojant Excel (Microsoft Office 2016) programą, DNR sekoskaitos rezultatams įvertinti naudojama MEGA11 (MEGA Software) programa. Rezultatai - Naudojant molekulinius tyrimo metodus buvo nustatyta, kad Lietuvos pilkųjų vilkų populiacijoje užsikrėtimas Mycoplasma spp. sudaro 6 proc. (n = 3), tirtose lapėse užsikrėtimas Mycoplasma spp. sudaro 4 proc. (n = 2), tirtuose šakaluose (n = 2) užsikrėtimas Mycoplasma spp. neaptiktas. Pilkuosiuose vilkuose ir rudosiose lapėse mikoplazma rūšies indentifikuoti nepavyko. Tačiau visos mūsų tirtos sekos parodė aukštą procentinį panašumą (100 proc.) su trimis mikoplazma rūšimis tai Mycoplasma haemocanis, Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasmas haemominutum. Pilkuosiuose vilkuose ir rudosiose lapėse mikoplazma bakterijų 16S rRNR genų fragmentai, kuriems atlikta sekoskaita skirtumų neparodė
Goal of the study – by applying molecular methods, to assess the infection of grey wolves (Canis lupus) and red foxes (Vulpes vulpes) and golden jackals (Canis aureus) with Mycoplasma spp. bacteria. Object of the study – Lithuanian dogs (Canidae) – grey wolves (Canis lupus), red foxes (Vulpes vulpes), golden jackals (Canis aureus). Study methodology/methods – Genomic DNA is isolated using the Genomic DNA Purification Kit, DNA purity, cleanliness and quantity are evaluated using the NanoDrop 2000 system, Mycoplasma spp. 16S rRNR and P nukleases gene amplification is performed using PCR, the results are visualized using a photograph taken under UV light of the electrophoresis gel. The resulting fragments are cut from the gel and are prepared for the sequencing using the GeneJET Gel Extraction Kit. The analysis of the obtained data was performed by using the Excel (Microsoft Office 2016) program, and the MEGA11 (MEGA Software) program was used to evaluate the results of DNA sequencing. Results – Using molecular methods, it was found that the prevalence of Mycoplasma spp. in the Lithuanian grey wolf population is 6 percent (n = 3). In the tested foxes, prevalence of Mycoplasma spp. is 4 percent (n = 2). In the tested jackals (n = 2), infection with Mycoplasma spp. not detected. All the sequences showed a high percentage similarity (100%) with Mycoplasma haemocanis, Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasmas haemominutum, however, the exact species of Mycoplasma in Canidae from Lithuania could not be determined.