Babesia spp. identifikavimas erkėse nuo stumbrų panaudojant 18S rRNR regiono sekų analizę
Globis, Elvinas |
Augantis erkių platinamų ligų paplitimas kelia rimtą grėsmę laukinių gyvūnų sveikatai, ypač rūšims, kurių imuninė sistema yra mažiau atspari infekcijoms. Viena tokių rūšių – europinis stumbras (Bison bonasus), kuriam erkių pernešami patogenai gali turėti reikšmingą poveikį sveikatai ir ilgalaikei populiacijos būklei. Nors pastaraisiais dešimtmečiais stebimas teigiamas rūšies atsikūrimas, B. bonasus vis dar įtrauktas į Tarptautinės gamtos apsaugos sąjungos (IUCN) raudonąjį sąrašą. Atsižvelgiant į siekį išlaikyti ir stiprinti šios rūšies populiacijas natūraliose buveinėse, tampa itin svarbu tirti rizikos veiksnius, galinčius turėti neigiamą poveikį jų sveikatai. Vienas tokių veiksnių – erkių platinamas patogenas Babesia, kuris gali trikdyti stumbrų adaptaciją laukinėje gamtoje ir ilgainiui stabdyti populiacijos augimą. Šio tyrimo tikslas nustatyti Babesia spp. rūšis erkėse surinktose nuo stumbrų Lenkijoje. Siekiant nustatyti erkių užsikrėtimą Babesia spp. buvo ištirta 500 erkių panaudojant tikrojo laiko PGR (TL-PGR). Gauti 38 erkių teigiami mėginiai buvo toliau analizuojami panaudojant lizdinę PGR, amplifikuojant 18S rRNR genų sekas. Gautos sekos buvo paruoštos sekoskaita ir išsiustos „Macrogen“ įmonei Olandijoje atlikti DNR sekoskaitą. Gautos 18S rRNR genų sekos, MEGA 12 programos pagalba, palygintos su sekomis NCBI (Nacionalinis biotechnologijų informacijos centras) duomenų bazėje ir atlikta filogenetinė analizė. Tyrimo rezultatai, atlikus TL-PGR analizė su 2024 m. erkių mėginiais buvo nustatyta 3,03% (6) užsikrėtimas Babesia spp. patogenais. Atlikus lizdinę PGR, iškirpti ir nusekvenuoti du teigiami Babesia spp. mėginiai ir tik viena seka buvo tinkama tolimesnei analizei. Palyginus seką NCBI duomenų bazėje, nustatyta, kad 5.2 mėginio erkė yra užsikrėtusi Babesia venatorum. Filogenetinė analizė atskleidė, kad nustatyta B. venatorum atmaina yra geografiškai artimesnė B. venatorum atmainoms nustatytoms Lietuvoje.
The increasing prevalence of tick-borne diseases poses a significant threat to the health of wild fauna, particularly to species susceptible to infections. One such species is the European bison (Bison bonasus), which might be vulnerable to tick-transmitted pathogens, potentially affecting individual health and long-term population stability. Although B. bonasus shows signs of recovery, it remains listed on the IUCN Red List. Given ongoing efforts to restore and conserve B. bonasus populations in the wild, it is crucial to investigate risk factors that may impact their survival. One such factor is the tick-borne pathogen Babesia, which can adversely affect bison health and hinder successful reintroduction into natural habitats. The purpose of this study is to identify Babesia spp. species present in ticks collected from bison in Poland. To identify the pathogen infected ticks, 500 tick samples were subject to real-time PCR. The 38 infected samples were subject to a nested PCR, followed by electrophoresis. The purified DNA fragments were sequenced in Macrogen laboratory in Netherlands. Using MEGA XI, a sequence comparison and a phylogenetic analysis were performed on retrieved 18S rRNA gene sequences. Research findings revealed that, from samples received in 2024, only 3.03% (6) were infected with Babesia spp. From 38 tick samples, 18S rRNA sequences were successfully amplified from two samples, and only one sequence was suitable for further sequence analysis. Reference sequence was compared with NCBI database sequences, indicating that tick was infected with Babesia venatorum. Phylogenetic analysis revealed that identified B. venatorum is geographically closer to B. venatorum variants identified in Lithuania.