Fermento lizocimo išskyrimas ir gryninimas iš vištos kiaušinio baltymo, antibakterinio ir antiioksidacinio poveikio įvertinimas
Grigaliūnas, Deividas |
Darbas buvo atliktas siekiant išgryninti vištos kiaušinio baltymą, įvertinti antibakterinį ir antiradikalinį aktyvumą. Darbe naudotos dvi gramteigiamos bakterijos Azotobacter vinelandii ir Lactiplantibacillus plantarum ir du fermentai: proteazę Bacillus , amilogliukozidazė, tyrimo objektas vištos kiaušinio baltymas. Literatūros apžvalgoje aptariama vištos kiaušinio cheminė sudėtis bei baltymų molekulinės struktūros, lizocimas ir jo cheminės savybės, baltymų denatūravimas, gryninimas ir gryninimų analizė, kitų autorių atlikti eksperimentai. Praktinėje dalyje aprašomi naudoti gryninimų metodai, baltymų hidrolizė, antibakterinis aktyvumas bei DPPH ir ABTS radikalų surišimo aktyvumas, kuris buvo optimizuotas tyrimo metu. Baltymų hidrolizė ir gryninimų metodai atlikti du kartus, pirmąkart patikrinant metodo tinkamumą ir įvertinant kontrolę. Antrą kartą atliekant bandymą optimizuotomis sąlygomis ir įvertinant hidrolizuotų baltymų radikalų surišimo aktyvumą ir antibakterinį aktyvumą prieš gramteigiamas bakterijas. Pirmu bandymo metu nustatyta, kad išgrynintas lizocimas turi antibakterinį ir antiradikalinį aktyvumą, geriausiomis antibakterinėmis savybėmis pasižymėjo lizocimo gryninimas amonio sulfatu ir atšaldytu acetonu. Antro bandymo metu nustatyta, kad hidrolizuotas baltymas pridedant fermentus skyla iki peptidų ir sureaguoja prieš laisvuosius radikalus DPPH, ABTS. Nustatyta, kad geriausiomis antriradikalinėmis savybėmis pasižymi hidrolizuotas baltymas pridedant fermentą amiloglikozidazė, o antibakterinis aktyvumas geriau pasižymėjo su hidrolizuotu baltymu pridedant proteazę Bacillus ir didesnis veikimas buvo prieš Lactiplantibacillus plantarum bakteriją.
Thesis aimed to purify chicken egg white lysozyme and evaluate its antibacterial and antioxidant activity. The study utilized two gram-positive bacteria, Azotobacter vinelandii and Lactiplantibacillus plantarum, and two enzymes ferment Bacillus and Amyloglucosidase with chicken egg white protein as the subject of investigation. The literature review discusses the chemical composition of chicken egg white and protein molecular structures, lysozyme and its chemical properties, protein denaturation, purification, and analysis of purifications, as well as experiments conducted by other authors. The practical part describes the purification methods used, protein hydrolysis, antibacterial activity, and DPPH and ABTS conditions optimized during the study. Protein hydrolysis and purification methods were performed twice, first to verify the method's suitability and assess the control. The second time, the experiment was conducted under optimized conditions, evaluating the antioxidant and antibacterial activity of hydrolyzed proteins against gram-positive bacteria. In the first experiment, it was found that purified lysozyme exhibited antibacterial and antioxidant activity, with the best antibacterial properties observed when lysozyme was purified with ammonium sulfate and cold acetone. It was noted that the most effective action was against Lactiplantibacillus plantarum bacteria. In the second experiment, it was found that hydrolyzed proteins, when enzymes were added, were cleaved into peptides and became activated against gram-positive bacteria and free radicals DPPH, ABTS. It was found that the hydrolyzed protein, with the addition of the enzyme Amyloglucosidase, exhibited the best antioxidant properties, while the antibacterial activity was better demonstrated with hydrolyzed protein supplemented with the enzyme Bacillus and the greater effect was against Lactiplantibacillus plantarum bacteria.